重组杀菌通透性增加蛋白对内毒素休克中肝脏一氧化氮合酶的影响

　　外科理论与实践重组杀菌通透性增加蛋白对内毒素休克中肝脏一氧化氮合酶的影响姚味明彭志齐董宁于燕盛志勇中国人民解放军第三四医院创伤外科中心中国人民解放军南京军事理工大学医院目的探讨重组杀菌通透性增加蛋白对内毒素休克中肝组织一氧化氮合酶的影响及其意义。

　　方法大鼠腹腔注射大肠杆菌内毒素复制内毒素休克模型，动物随机分成正常对照组内毒素休克组和治疗组。

　　检测肝组织活性三磷酸鸟昔环水解酶（I一性及生物喋吟含量，同时还观察肝脏微循环血流灌注量的改变。

　　结果内毒素攻击后肝组织诱生型）S活性急剧升高但原生型性变化不明显（尸治疗可显著抑制活性，明显提高肝脏微循环灌注量（尸同时局部组织的一活性降低（尸生物喋吟含量也显著下降尸结论内毒素休克早期给予能选择性抑制肝组织活性并改善局部微循环，其作用机理可能与降低组织一活性及其介导生物喋吟诱生有关。

　　关键词休克，脓毒性杀菌/通透性增加蛋白一氧化氮合酶生物喋吟肝损害ti村鳍月b印乃刀一体外试验结果显示，杀菌/通透性增加蛋白作为宿主中性粒细胞中自然存在的防御性蛋白，能与多种革兰阴性菌脂多糖分子结合，并抑制脂多糖诱导的细胞应答反应近期观察证实，重组段刃能有效减轻内毒素休克时全身血流动力学紊乱及组织微循环障碍，但其作用机理尚不清楚本研究应用大鼠内毒素攻击模型，旨在探讨对内毒本课题为国家重点基础发展规划项目（批准号国家自然科学基金（批准号军队杰出中青年人才专项基金（批准号3）和中国工程院利技奖基金资助项目素诱导肝组织一氧化氮合酶的影响及其意义。

　　材料与方法实验动物及模型备雄性无特殊病原菌大鼠，体重一肌肉注射氯胺酮和甲苯唾嗓分别为1）麻醉后，动物腹腔一次性注射大肠杆菌内毒素美国公司产品）复制内毒素休克模型。

　　实验分组只大鼠随机分为正常对照组（n内毒素休克组（简称休克组，和治疗组（简称治疗组，二治疗组动物于内毒素攻击静脉注射美国公司产品总剂量休克组则给予等量的对照蛋白一其与分子量等电点相似，但与脂多糖分子无特异性结合作用。

　　休克组治疗组动物分别于内毒素攻击后活杀（各时相点动物数均为10只），留取肝组织标本待测。

　　活性参照文献报道方法测肝组织总活性和非依赖性活性（诱生型总活性与活性之差为原生型活性（结果以每分钟蛋白表示。。4三磷酸鸟昔环水解酶活性肝组织匀浆分离上清液过柱（S一洗脱一甘油，林氟化苯甲磺酸，一二琉基赤鲜醇洗脱液与混匀（总体积林水浴加人和终止反应。

　　反应产物三磷酸二氢新喋吟氧化成三磷酸新喋吟后，经碱性磷酸酶s（作用进一步生成新喋吟。

　　通过高效液相色谱法检测新喋吟含量型美国公司生产），从而间接反映组织中一活性。

　　生物喋吟含量采用过氯酸氧化法检测将一的缓冲液加人组织中，冰水浴匀浆，然后分离上清上清液用过氯酸处理及氧化后，采柱反相高效液相色谱法分析型美国公司生产微循环血流灌注量检测沿腹中线打开腹腔，分离暴露肝脏。

　　应用双通道激光多普勒血流似瑞典公司生产）测定肝左外叶微循环血流灌注量，结果以灌注单位单位表数据处理数据以均数士标准差倾士表示，用统计软件进行处理，采用检验方差分析和相关分析。

　　表结果显示，内毒素休克大鼠肝组织活性呈现升高趋势，但与对照组相比无明显差异而活性则大幅度上升，内毒素攻击后其为基础值倍给予治疗可有效抑制肝组织活性（尸但对活性无明显影响尸表肝组织活性改变（无土活性活性组别对照组休克组石土治疗组。石4士0.

　　0石。士。召1巾巾与对照组比较，尸非非与休克组比较，尸组织一活性及生物喋吟含量变化内毒素攻击后肝组织一活性显著升高（尸生物喋吟含量亦明显上升尸早期给予Z工治疗，组织一活性迅速下降，内毒素攻击后逐渐恢复至正常范围尸与之相似，治疗组生物喋吟水平与对照组无明显差异（尸表月干组织一活性和生物喋岭含*变化衍士一活性（生物喋吟含量组别对照组休克组治疗组非非士朴斗土自与对照组比较尸夸与休克组比较尸表治疗对内毒素休克大鼠肝脏微循环灌注量的影响无土时间组别对照组召士5 1注休克组中治疗组巾井非材与对照组比较，尸一非斗与休克组比较，结果组织和活性改变。3肝脏微循环灌注量变化休克组肝脏微循环灌注量迅速下降，时其分别为对照组的治疗组动物肝脏微循环障碍明显改善，内毒素攻击后其灌注量显著高于休克组（尸则趋于正常对照值（表相关分析显示，休克组动物微循环灌注量与组织活性呈显著负相关外科理论与实践年第卷第期讨论近年，一氧化氮（）在脓毒性休克中的作用日益受到重视，其是介导休克时血流动力学变化和组织损害的主要介质之一。

　　一方面，的适量合成有助于维持局部肝组织微循环稳定另一方面，脓毒症时介导大量产生则可造成肝组织损害和血流灌注异常，是诱发急性肝功能障碍的重要因素。

　　因此，选择性针对活性进行调控，对防治脓毒性休克时的肝功能受损可能具积极作用本实验结果证实，内毒素休克动物肝组织活性改变不显著，活性则急剧升高早期给予治疗后，可明显抑制组织活性，但对活性影响不大。

　　进一步分析可见，局部组织活性变化与微循环灌注量呈显著负相关，表明治疗组肝脏微循环改善与活性降低有关。

　　由此可见，脓毒性休克后及时给予内毒素拮抗剂治疗可选择性地下调组织的过量表达，有效地提高肝脏微循环灌注量，从而可防止急性肝脏缺血性损害的发生和发展。

　　这与我们既往的观察结果一致，即拮抗内毒素治疗能明显改善脓毒性休克时血流动力学及内脏循环灌注，并显著提高动物存活率众多研究显示，完整及其活性片段对大鼠家兔拂拂等多种动物革兰阴性菌感染或内毒素攻击均可产生良好的防护作用临床试验性治疗证明，可显著抑制人体内毒素血症诱发的一系列免疫病理反应，初步显示在人类脓毒症及其相关疾病防治中的潜在价值对内毒素诱导肝损害的保护作用机理涉及多个方面一方面其可阻断内毒素所致炎性细胞因子合成释放过程，另一方面还能有效抑制局部组织过量产生。

　　然而，甄治疗影响内毒素诱导肝组织和活性的详细机理目前缺乏了解。

　　本研究发现，治疗能降低的重要辅因子一生物喋吟及其合成首要限速酶一的活性，从而进一步阻止体内的大量产生与释放业已证明，生物喋吟作为主要是重要辅因子在调节机体病理生理反应中具有一定意义。

　　其可通过氧化一还原反应和变构效应调节活性，催化的生成同时，还能增强的稳定性，上调该酶的表达有鉴于此，抑制肝组织一活性及其介导的生物喋吟产生，可显著降低的活性，而对细胞内活性影响较小。

　　这样，既避免了大量对肝脏的损害作用，又可维持基础水平对局部微循环的保护效应参考文献姚咏明，吴叶，盛志勇。

　　杀菌/通透性增加蛋白防治革兰氏阴性菌脓毒症的研究现状。

　　中国危重病急救医学，二姚咏明，彭志齐，常国友，等。

　　杀菌/通透性增加蛋白对内毒素休克大鼠微循环灌注的保护作用。

　　中华麻醉学杂志，一氏姚咏明，赵晓东，于燕，等。

　　内毒素休克大鼠组织生物喋吟及其合成限速酶基因表达的改变。

　　中华外科杂志，凡李红云，姚咏明，施志国。

　　生物喋吟的生物学效应及其在脓毒症中的作用。

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(完)